§1
실험 개요
박테리아 정량은 식품 안전·임상 진단·산업 발효의 기본이다. 희석평판법은 시료를 단계 희석 후 한천 평판에 도말해 자란 콜로니 수를 세는 가장 보편적인 방법이다. 한 콜로니가 한 살아있는 세포에서 시작했다는 가정에서 CFU/mL을 산출한다.
§2
이론 배경
Serial dilution
시료를 10배씩 단계 희석(10⁻¹, 10⁻², ...). 콜로니 30~300개 사이가 통계적으로 신뢰할 수 있는 영역.
CFU/mL 계산
CFU/mL = (콜로니 수)/(도말량 × 희석배수). 예: 10⁻⁴ 희석 0.1 mL 도말에서 150 콜로니 → 1.5 × 10⁷ CFU/mL.
§3
실험 장치 및 시약
- — 멸균 한천 평판
- — 마이크로피펫
- — 도말봉(L봉)
- — 37°C incubator
§4
실험 절차
- 1.시료를 멸균 saline에 단계 희석 (10⁻¹ ~ 10⁻⁶).
- 2.각 희석 단계 100 μL를 평판에 도말.
- 3.37°C 24시간 incubation.
- 4.콜로니 수가 30~300개인 평판을 골라 카운트.
§5
데이터 처리
신뢰 가능한 평판의 콜로니 수에서 CFU/mL 계산. 같은 희석 단계 평판 3개의 평균 사용.
§6
예비보고서 항목별 작성 팁
이론
왜 30~300 범위가 통계적으로 적절한지 (Poisson 분포 ± 5% 오차).
안전
시료에 따라 BSL 등급. 폐기 전 멸균.
§7
자주 하는 실수
- — 도말 시 한천 표면 긁힘 (플레이트 깊이 측정 어려움)
- — 콜로니 너무 많아서 confluent → 카운트 불가
- — 평판 건조 부족으로 도말액이 흐름
§8
자주 묻는 질문
Q. 왜 하나의 콜로니가 하나의 세포에서 시작한다고 가정하나요?
도말 시 충분히 분산되었다고 가정하기 때문입니다. 실제로는 두 세포가 가까이 붙어 시작한 콜로니가 하나로 보일 수 있어 "colony forming unit"이라는 표현을 씁니다 — 단일 세포가 아닌 콜로니를 형성한 "단위"라는 뜻.
Q. 왜 24시간 후에 카운트하나요?
박테리아 종마다 콜로니가 보일 정도로 자라는 시간이 다릅니다. 대장균은 18~24시간, 일부 느린 균은 48시간 이상 필요. 너무 일찍 카운트하면 작은 콜로니를 놓치고, 너무 늦으면 콜로니가 합쳐져 카운트 불가.
§9
참고 표준·문헌
본 가이드는 다음 표준·교과서·핸드북의 정의·식·표준 절차를 따라 작성되었습니다. 학교 양식과 표준 절차가 다를 경우 학교 양식을 우선합니다.
- [1]Madigan, M.T. et al. — Brock Biology of Microorganisms, 16th ed., Pearson, 2021
- [2]Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 23rd ed., APHA-AWWA-WEF, 2017