효소 활성 측정 예비보고서 작성 가이드

효소 활성 측정은 생화학 실험의 기초 기법이다. 기질 농도를 변화시키며 초기 반응 속도를 측정하고, Michaelis–Menten 식에 적합해 K_m(친화도)과 V_max(최대 속도)를 결정한다. 학부에서는 보통 카탈라아제의 H₂O₂ 분해 또는 알칼리 인산가수분해효소(ALP)가 p-니트로페닐인산을 가수분해하는 반응을 405 nm에서 흡광 변화로 추적한다. 예비보고서에서는 효소반응의 가정(정상상태, 초기속도)과 Lineweaver–Burk·Eadie–Hofstee 같은 선형화 기법을 정리한다.

• — UV–Vis 분광광도계
• — 마이크로피펫, 큐벳
• — 효소 원액(ALP, 카탈라아제 등)
• — 기질 모액(p-NPP 또는 H₂O₂)
• — 버퍼(pH 9, 트리스 또는 글리신 버퍼)

1. 1.버퍼와 기질을 일정 비율로 혼합해 6단계 기질 농도를 준비한다.
2. 2.효소 원액을 제외한 모든 성분을 큐벳에 넣고 분광광도계를 영점화한다.
3. 3.효소를 가하고 즉시 분광광도계의 시간 추적 모드를 시작한다.
4. 4.60~120초간 흡광도 변화 ΔA/Δt를 기록한다.
5. 5.각 기질 농도에서 3회 반복 측정한다.

ΔA/Δt를 ε(p-NP) = 18,500 M⁻¹ cm⁻¹로 나눠 v(M/s)를 구한다. v vs [S]를 비선형 회귀해 K_m, V_max를 결정하고, Lineweaver–Burk 그래프로 시각적 검증을 한다. 효소 농도로 나눈 k_cat = V_max/[E]_T를 계산해 turnover number를 보고한다.

• — 초기속도가 아닌 평균속도로 K_m, V_max를 추정하는 것
• — 기질 농도 범위를 K_m 부근에 충분히 두지 않는 것 (0.2 K_m ~ 5 K_m 권장)
• — 효소를 사용 직전에 희석하지 않아 활성이 떨어진 상태로 측정하는 것
• — 온도 보정을 하지 않고 데이터를 비교하는 것

본 가이드는 다음 표준·교과서·핸드북의 정의·식·표준 절차를 따라 작성되었습니다. 학교 양식과 표준 절차가 다를 경우 학교 양식을 우선합니다.

1. [1]Nelson, D.L., Cox, M.M. — Lehninger Principles of Biochemistry, 8th ed., Macmillan, 2021
2. [2]Atkins, P., de Paula, J., Keeler, J. — Physical Chemistry, 11th ed., Oxford University Press, 2018

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