§1
실험 개요
MTT 시험은 약물의 세포 독성·세포 증식 평가에 가장 보편적인 colorimetric 시험이다. 살아있는 세포가 노란색 MTT를 보라색 formazan으로 환원시키고, 그 양이 활성 미토콘드리아 수에 비례해 생존율의 척도가 된다.
§2
이론 배경
MTT 환원
세포 내 NAD(P)H 의존적 산화환원 효소(주로 미토콘드리아)가 MTT를 formazan으로 환원. 죽은 세포는 효소 활성 없음.
신호 정량
formazan은 DMSO에 녹여 570 nm에서 흡광도 측정. 흡광도 ∝ 활성 세포 수 (linear 영역에서).
§3
실험 장치 및 시약
- — 96-well 세포배양 플레이트
- — 세포 (HeLa, MCF-7 등)
- — MTT 시약
- — DMSO
- — 마이크로플레이트 reader
§4
실험 절차
- 1.well당 1×10⁴ 세포 seeding, 24시간 incubation.
- 2.약물을 다양한 농도로 처리, 24~48시간 incubation.
- 3.MTT 용액(5 mg/mL) 10 μL 첨가, 37°C 4시간 incubation.
- 4.배양액 제거, DMSO 100 μL로 formazan 용해.
- 5.570 nm에서 흡광도 측정.
§5
데이터 처리
% 생존율 = (Atreated − Ablank)/(Acontrol − Ablank) × 100. 약물 농도 vs 생존율 곡선에서 IC₅₀ 산출.
§6
예비보고서 항목별 작성 팁
이론
왜 미토콘드리아 활성이 세포 생존의 지표가 되는지 설명.
§7
자주 하는 실수
- — DMSO 자체 세포 독성을 무시 (>1% 농도)
- — well 가장자리 효과(증발) 보정 안 함
- — 초기 세포 수 차이 고려 안 한 절대 비교
§8
자주 묻는 질문
Q. IC₅₀가 무엇이고 왜 중요한가요?
세포 생존율을 50%로 떨어뜨리는 약물 농도입니다. 약물 효능을 비교하는 표준 지표이며, 다른 세포주·약물 간 직접 비교가 가능합니다. 일반적으로 log scale로 농도를 표시한 dose-response 곡선에서 결정됩니다.
Q. MTT와 다른 viability assay(MTS, WST) 차이는?
MTS·WST는 formazan이 수용성이라 DMSO 용해 단계 불필요, 더 빠르고 재현성이 좋지만 비쌈. MTT는 가장 오래되고 보편적이며 저렴, 단점은 DMSO 용해 단계가 추가되는 것. 학부 실험은 MTT가 일반적.
§9
참고 표준·문헌
본 가이드는 다음 표준·교과서·핸드북의 정의·식·표준 절차를 따라 작성되었습니다. 학교 양식과 표준 절차가 다를 경우 학교 양식을 우선합니다.
- [1]Nelson, D.L., Cox, M.M. — Lehninger Principles of Biochemistry, 8th ed., Macmillan, 2021